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大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的使用和樣本的處理方法介紹

更新時(shí)間:2021-11-17點(diǎn)擊次數(shù):1655
  1、收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
  2、細(xì)胞傳代:
  1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,清洗細(xì)胞一次。
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。
  3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸, 然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入379C, 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  4)待細(xì)胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
  3、細(xì)胞凍存:
  1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次。
  2)添加胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。
  3)用適量的凍存液懸細(xì)胞,并放置于凍存管中。
  4)先將大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞凍存管放置于20°C 1.5h,然后將其移,入-80°C過(guò)夜, 24h后轉(zhuǎn) 入液氨中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80°C。
  正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的一步,下面簡(jiǎn)單介紹一下不同類型的樣本的處理方法:
  1.血清。血清是常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本,處理也比較簡(jiǎn)單,采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。
  2.血漿。用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融,避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
  3.細(xì)胞培養(yǎng)上清,取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
  4.細(xì)胞裂解液。
  5.組織勻漿液。
  6、尿液、唾液等其他液體生物樣本。
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